目前合成(2S,5S)‑N‑叔丁氧羰基‑5‑羟基‑2‑哌啶甲酸乙酯的方法均存在明显不足，难点在于顺式哌啶酸六元环的构建。本发明以5‑羟基‑2吡啶甲酸为起始原料，通过酯化成盐、还原、上Boc、氧化、上保护、脂肪酶手性拆分、上Boc、去保护和还原酶还原9步得(2S,5S)‑N‑叔丁氧羰基‑5‑羟基‑2‑哌啶甲酸乙酯或/和(2S,5R)‑N‑叔丁氧羰基‑5‑羟基‑2‑哌啶甲酸乙酯。本发明的反应条件温和易控、操作简便，且所用反应试剂均价格低廉、大大降低了生产成本，反应副产物毒性较小、对环境较友好，有利于大规模生产。